Significado clínico dos anticorpos antinucleares na artrite reumatóide juvenil / Clinical significance of antinuclear antibodies in juvenile rheumatoid arthritis

Os anticorpos antinucleares (AAN) têm sido demonstrados em freqüência extremamente variável na artrite reumatóide juvenil (ARJ), dependendo do substrato empregado e da seleçäo dos pacientes. Além disso, a associaçÝo entre estes anticorpos e a atividade ou a gravidade da doença näo está bem estabelecida. Objetivo: Determinar a freqüência dos AAN e possível associaçöes com diferentes parâmetros clínicos da ARJ, como duraçäo, atividade e gravidade da doença. Material e métodos: 86 pacientes com ARJ foram estudados quanto à presença de AAN (pesquisados pelo método de imunofluorescência indireta em células HEp-2); 32 pacientes com lúpus eritematoso sistêmico juvenil e 52 crianças saudáveis constituíram os grupos-controles. A atividade da doença foi definida segundo uma escala de dois pontos, enquanto a gravidade foi avaliada pelo grau de capacidade funcional. Resultados: AAN foram encontrados em 36 (42 por cento) pacientes com ARJ, sendo mais prevalentes no tipo de início oligoarticular do que no sistêmico (p<0,05). Uma associaçäo com a duraçäo, atividade ou a gravidade da doença näo foi evidenciada (p>0,05), embora uma tendência tenha sido observada em pacientes do tipo de início poliarticular, em atividade de doença (P=0,054). O padräo pontilhado fino foi o mais freqëntemente observado (64 por cento), conquanto outros padröes, como o centrossômico e o do corpo intermediário, também tivessem sido notados. Conclusäo: Anticorpos antinucleares foram encontrados em menor freqüência que aquela descrita na maioria dos trabalhos da literatura para a ARJ, nÝo apresentando associaçäo com o sexo, duraçäo, atividade ou gravidade de doença. Embora o padräo de fluorescência mais freqüente tenha sido o pontilhado, a presença de padröes inusitados de fluorescência nuclear sugere que AAN na ARJ possam apresentar especificidades ainda näo definidas, que poderäo futuramente ser melhor caracterizadas

Development of an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of anti-native DNA antibodies using DNA from "Crithidia luciliae" as substrate

DNA de cinetoplasto de Crithidia luciliae (kDNA) foi isolado e purificado para desenvolvimento de ensaio imunoenzimático para detecçao de anticorpos anti-DNA nativo. O kDNA foi obtido por lise das células com dodecil sulfato de sódio (SDS) e pronase E e purificado por ultracentrifugaçao sobre soluçao de sacarose a 20 por cento e extraçao protéica. A pureza do kDNA foi verificada pela razao de densidades ópticas a 260 e 280nm e por eletroforese em gel de agarose, após digestao com as enzimas de restriçao HindIII e HaeIII. DNA de timo de vitelo, DNA plasmidial bacteriano e DNA cromossômico de Micrococcus lysodeikticus foram também empregados como substrato para ELISA. Foram testados 158 soros de pacientes atendidos no ambulatório da Disciplina de Reumatologia da Escola Paulista de Medicina, UNIFESP, sendo 65 com lúpus eritematoso sistêmico (LES), 30 com artrite reumatóide, 27 com esclerose sistêmica e 36 com outras doenças reumáticas auto-imunes. Foram também testados 105 soros obtidos de pacientes que estavam sendo investigados quanto a apresentarem LES e 30 soros de controles sadios. Nossos resultados mostraram que o kDNA pode ser purificado e utilizado com sucesso como substrato alternativo em ELISA. Entretanto, o mesmo nao ocorre com DNA cromossômico obtido de M. lysodeikticus, mostrando a necessidade de avaliaçao cuidadosa da fonte de DNA para detecçao de anticorpos anti-DNA, em testes imunoenzimáticos

Padronizaçäo da técnica de imunofixaçäo na detecçäo e identificaçäo de paraproteínas séricas / Standartization of immunofixation technique for detection and identification of seric paraproteins

O diagnóstico e seguimento das paraproteinemias requer a identificaçäo e tipagem de paraproteínas (PP). A imunoeletroforese (IEF) é o método comumente usado embora demorado e pouco sensível. A técnica de imunofixaçäo (IF) é superior por ser mais sensível, rápida e de fácil interpretaçäo, particularmente no reconhecimento de PP presentes em baixa concentraçäo no soro e/ou urina. Consiste de fase eletroforética, seguida de fixaçäo, quando o anti-soro é colocado sobre o gel, precipitando a proteína. Objetivo. Este estudo objetiva padronizar a técnica de IF e compará-la à IEF. Métodos. Foram estudados os soros de 28 pacientes, sendo 25 portadores de mieloma múltiplo e 3 com hipergamaglobulinemia policlonal, comparados com 6 indivíduos normais. Todos foram submetidos à eletroforese (EF) em gel de agarose, à IEF e à IF. Resultados. O principal problema na padronizaçäo da IF foi a determinaçäo da diluiçäo que estabelecesse proporçäo ideal entre antígeno e anticorpo. A concentraçäo sérica ideal da PP, neste estudo, variou de 28 a 35 g/dL. A PP foi detectada e caracterizada por ambas as técnicas em 21 (84 por cento) dos indivíduos e näo detectada por nenhuma delas em 2 (8 por cento). Em outros 2, somente a IF conseguiu identificar a PP. Näo houve banda monoclonal à EF e à IEF que näo fosse identificada pela IF. Conclusäo. Nossos resultados permitem concluir que a IF é mais sensível que a IEF e deve ser incorporada à rotina de diagnóstico

Avidez de anticorpos IgG especificos como marcadores de infeccao primaria recente pelo Toxoplasma gondii / Avidity of especific IgG antibodies as markers of recent primary infection caused by Toxoplasma gondii

A caracterizacao de infeccao primaria recente pelo Toxoplasma gondii se apoia principalmente na presenca, no soro, de anticorpos especificos IgM. Para fins diagnosticos de toxoplasmose aguda, ou de contagio recente, a possibilidade de outros marcadores e altamente desejavel. Um marcador de infeccao recente atualmente referido e a baixa afinidade ou avidez de anticorpos especificos IgG. Para avaliacao do novo marcador, titularam-se os soros contra poliantigenos do T.gondii pelo teste imunoenzimatico (ELISA), antes e apos tratamento dos complexos antigeno-anticorpo formados, com solucao de ureia 6 M como agente dissociante. O deslocamento de anticorpos de baixa avidez foi indicado por uma queda de titulos, calculada em porcentagem em relacao aos titulos iniciais. Foram estudados 69 soros, 23 de cada um dos 3 perfis sorologicos sucessivos, observados na infeccao, e que a caracterizam respectivamente como recente, em fase de transicao e cronica. Os perfis foram determinados segundo os resultados de uma bateria de testes, incluindo os de imunofluorescencia IgG e IgM, de captura de anticorpos IgM e de hemaglutinacao. Para os soros de infeccao cronica a queda observada foi de 3 por cento ñ 3 por cento, de 34 por cento ñ 12 por cento para toxoplasmose recente e de 12 por cento ñ 9 por cento para a fase de transicao...

A simple radial immunohemolysis assay for the measurement of functional complement C2 activity / O ensaio simples de imunohemolise radial para medir da atividade funcional do complemento 2

This study describes a simple radial immunohemolysis method for determining the hemolytic activity of the second component of complement (C2) in human serum. The assay is based on the recovery of hemolytic activity of normal serum which has been pretreated to anactivate endogenous C2 and thenmixed with test serum containing an unknown amount of C2. The pretreated serum, designated R2 reagent, is obtained by heating normal human sera under carefully standardized conditions of temperature, time, volume and type of test tube. R2 reagent is incorporated into agarose together with hemolysin-sensitized erythrocytes, and spread om a plate. The test serum is placed in wells cut in the agarose and, after appropriate incubation, the diameters of the hemolytic areas are measuremed.The area of hemolysis is directly proportional to the logarithm of the serum concentration.As a standard for C2 functional activity, dilutions of a pool of normal sera are tested on the same plate. The method is specific for C2 and can deted as little as 20% of the C2 in normal serum (abouth 6 *g C2 protein/ml). The error in reproducibility is about 3% of the mean.in normal serum, the lower confidence limit of the distribution of the C2 values (based on a sample of 80 individuals) corresponded to 70 % of undiluited serum. This method is sultable for use in clinical laboratories since it is simple, rapid quantitative ans inexpensive, and does not require special equipement

Critical study of the effect of temperature on total serum complement determination

Basic rules establish that the total serum complement determination (CH50) should be done after quick serum separation at 4 degrees Celsius. When there is a long period between blood sample collection and laboratory tests, the results may not be exact, with findings being below normal level due to thermolability and dysfunction of some of the components. Sera from 15 normal individuals and 15 patients with Systemic Erithematous Lupus (SEL) were studied. CH50 determinations were performed by the radial immunohemolysis technique according to the above basic rules and compared to determinations performed after 4, 8, 12 and 24 h in sera maintained at room temperature and after 24 h in those maintained at 4 degrees Celsius. Five samples (2 controls and 3 lupoid) were stored at -2O degrees Celsius and -7O degrees Celsius. CH50 determinations were performed weekly in sera kept at -2O degrees Celsius and after l month in those stored at -7O degrees Celsius. Analysis of the results suggest that, if blood samples are kept at room temperature and the determination is performed within about 8 h, the results are still reliable, that is, they will be within normal levels. The same will happen if the sera are stored at -2O degrees Celsius or -7O degrees Celsius for up to l month.

Toxoplasmosis serology: an efficient hemagglutination procedure to detect IgG and IgM antibodies

Avaliou-se o tste de hemaglutinaçäo Hematoxo, associado ou näo à previa remoçäo de IgG do soro pela Proteína A, como procedimento de rotina para o diagnóstico sorológico da toxoplasmose. A capacidade diagnóstica do teste foi investigada em soros já classificados por uma bateria de testes, de imunofluorescência, hemaglutinaçäo e imunoenzimático de captura de IgM, segundo os diferentes perfis sorológicos observados na toxoplasmose. Revelando desde 5 U.I. de anticorpos IgG por mililitro de soro, Hematoxo evidenciou estreita concordância quanto à reatividade e näo reatividade em 443 soros näo reagentes e 387 soros reagentes. De 23 casos de toxoplasmose aguda com perfil I, o teste de hemaglutinaçäo detectou IgM em 18, pela negativaçäo ou queda significativa de títulos após tratamento das amostras com 2-mercapto-etanol. Porém, obteve-se nítido aumento da sensibilidade do teste Hematoxo para anticorpos IgM removendo-se IgG das amostras. Para esse fim reconstituiu-se uma suspensäo liofilizada de estafilococos produtores de Proteína A com a diluiçäo do soro, que depois de centrifugada era utilizada no teste. Desse modo, Hematoxo, como teste qualitativo, mostrou-se adequado para a identificaçäo de reatores e näo reatores, por exemplo, na triagem de gestantes de risco. Como teste quantitativo, permitiu o diagnóstico das várias fases sorológicas da toxoplasmose, pela titulaçäo de anticorpos IgG e pela evidenciaçäo de anticorpos IGM. De realizaçäo simples e baixo custo, Hematoxo mostra-se um teste adequado para a rotina diagnóstica

Sarcoma de Kaposi em homossexuais jovens do sexo masculino. Relato de dois casos. / Kaposi's sarcoma in young male homosexuals. Report of 2 cases

Sao apresentados dois casos de sarcoma de Kaposi (SK) em homossexuais jovens do sexo masculino previamente sadios. Os dados epidemiologicos e o deficit de resposta linfocitaria a estimulacao com fito-hemaglutinina sugerem, em ambos os casos, a possibilidade da ocorrencia do SK como forma de expressao da sindrome da imunodeficiencia adquirida (AIDS)

Doenca mista do tecido conectivo em criancas e adolescentes. / Mixed connective tissue disease in children and adolescents

Desde a descricao pioneira da doenca de tecido conectivo, somente 56 casos foram descritos na literatura em criancas e adolescentes. Acrescentamos 2 casos. Os principais sintomas foram poliatrite, fenomeno de Raynaud, febre, alteracoes cutaneas e miosite. Um dos pacientes mostrou elevacao da IgE serica e nodulos subcutaneos. A maioria das manifestacoes clinicas da doenca respondeu a doses variaveis de corticosteroide